肥料中蛔蟲卵死亡率的測定 GB/T 19524.2—2004

2017-04-19  來自: 鶴壁市百惠生物科技有限公司 瀏覽次數:684

1 范圍

本標準規定了肥料中蛔蟲卵死亡率的測定方法。

2 測定方法原理

將堿性溶液與肥料樣品充分混合,分離蛔蟲卵,然后用密度較蛔蟲卵密度大的溶液為漂浮液,使蛔蟲卵漂浮在溶液的表面,從而收集檢驗。

3  試驗方法

3.1  儀器設備(略)

3.2  試劑(略)

3.3   檢驗程序

3.3.1  蛔蟲卵分離

稱取5.0~10.0?g樣品(顆粒較大的樣品應先進行研磨),放于容量為50?mL離心管中,注入NaOH溶液25~30?mL,另加玻璃珠約10粒,用橡皮塞塞緊管口,放置在振蕩器上,靜置30?min后,以200~300?r/?min頻率振蕩10~15?min。振蕩完畢,取下離心管上的橡皮塞,用玻璃棒將離心管中的樣品充分攪勻,再次用橡皮塞塞緊管口,靜置15~30?min 后,振蕩10~15?min。

3.3.2  離心沉淀

從振蕩器上取下離心管,拔掉橡皮塞,用滴管吸取蒸餾水,將附著于橡皮塞上和管口內壁的樣品沖入管中,以2000~2500?r/?min速度離心3~5?min后,棄去上清液。然后加適量蒸餾水,并用玻璃棒將沉淀物攪起,按上述方法重復洗滌三次。

3.3.3  離心漂浮

往離心管中加入少量飽和?NaNO3?溶液,用玻璃棒將沉淀物攪成糊狀后,再徐徐添加飽和?NaNO3?溶液,隨加隨攪,直加到離管口約1?cm為止,用飽和?NaNO3?溶液沖洗玻璃棒,洗液并入離心管中,以2000~2500?r/?min速度離心3~5?min。

用金屬絲圈不斷將離心管表層液膜移于盛有半杯蒸餾水的燒杯中,約30次后,適當增加一些飽和NaNO3?溶液于離心管中,再次攪拌、離心及移置液膜,如此反復操作3~4次,直到液膜涂片觀察不到蛔蟲卵為止。

3.3.4       抽濾鏡檢

將燒杯中混合懸液,通過覆以微孔火棉膠濾膜的高爾特曼氏漏斗抽濾。若混合懸液的渾濁度大,可更換濾膜。

抽濾完畢,用彎頭鑷子將濾膜從漏斗的濾臺上小心取下,置于載玻片上,滴加二、三滴甘油溶液,于低倍顯微鏡下對整張濾膜進行觀察和蛔蟲卵計數。當觀察有蛔蟲卵時,將含有蛔蟲卵的濾膜進行培養。

3.3.5       培養

在培養皿的底部平鋪一層厚約1?cm?的脫脂棉,脫脂棉上鋪一張直徑與培養皿相適的普通濾紙。為防止霉菌和原生動物的繁殖,可加入甲醛溶液或甲醛生理鹽水,以浸透濾紙和脫脂棉為宜。

將含蛔蟲卵的濾膜平鋪在濾紙上,培養皿加蓋后置于恒溫培養箱中,在28?℃~30?℃?條件下培養,培養過程中經常滴加蒸餾水或甲醛溶液,使濾膜保持潮濕狀態。

3.3.6  鏡檢

培養10~15?d?,自培養皿中取出濾膜置于載玻片上,滴加甘油溶液,使其透明后,在低倍鏡下查找蛔蟲卵,然后在高倍鏡下根據形態,鑒定卵的死活,并加以計數。鏡檢時若感覺視野的亮度和膜的透明度不夠,可在載玻片上滴一滴蒸餾水,用蓋玻片從濾膜上刮下少許含卵濾渣,與水混合均勻,蓋上蓋玻片進行鏡檢。

3.3.7  判定

凡含有幼蟲的,都認為是活卵,未孵化或單細胞的都判為死卵。

3.3.8       結果計算

K=100(N1-N2)/ N1

式中:

K?—蛔蟲卵死亡率(%)

N1—鏡檢總卵數

N2—培養后鏡檢活卵數

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